बीआई-ईआईए-थायराइड-एंटी-टीपीओ प्लेटें मानव थायराइड पेरोक्सीडेज से लेपित हैं। परीक्षण किए जाने वाले सीरम को पतला किया जाता है और प्रीकोटेड प्लेट के साथ इनक्यूबेट किया जाता है। इस चरण में टीपीओ विशिष्ट एंटीबॉडी स्थिर मानव थायराइड पेरोक्सीडेज से बंधे होते हैं। गैर विशिष्ट एंटीबॉडी धोने से हटा दिए जाते हैं। हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) से संयुग्मित मानव-विरोधी आईजीजी को जोड़ा और ऊष्मायन किया जाता है। इस चरण में एचआरपी-संयुग्म प्रीबाउंड एंटीजन-एंटी बॉडी कॉम्प्लेक्स से बंधा होता है। अनबाउंड कंजुगेट को धोने से हटा दिया जाता है। विशिष्ट एंटीबॉडी के नमूने में उपस्थिति का संकेत देने वाले बाध्य एंजाइम की उपस्थिति टीएमबी-सब्सट्रेट समाधान में रंग परिवर्तन से प्रकट होती है
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