प्रोजेस्टेरोन एक एक-चरणीय इम्यूनोपरख है, जो प्रतिस्पर्धी पद्धति के सिद्धांत पर आधारित है। नमूने में मौजूद प्रोजेस्टेरोन और संयुग्म में लेबल एंजाइम-प्रोजेस्टेरोन एंटी-प्रोजेस्टेरोन लेपित माइक्रो प्लेट पर कैप्चर एंटीबॉडी से जुड़ने के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं। एंटीबॉडी-बाउंड अंश में एंजाइम गतिविधि मूल प्रोजेस्टेरोन एकाग्रता के विपरीत आनुपातिक है। अनबाउंड घटकों को धोने से हटा दिया जाता है। टीएमबी और हाइड्रोजन पेरोक्साइड युक्त घोल मिलाने के बाद, बाध्य संयुग्म वाले कुओं में एक नीला रंग विकसित होता है जो सल्फ्यूरिक एसिड के साथ प्रतिक्रिया बंद होने के बाद पीले रंग में बदल जाता है। रंग की तीव्रता नमूने में प्रोजेस्टेरोन की सांद्रता के व्युत्क्रमानुपाती होती है और इसे 450 एनएम पर पढ़ा जा सकता है।
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